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技術(shù)文章

Technical articles
  • 2014

    10-9

    本周探討--細(xì)胞培養(yǎng)失敗的主要原因???

    消毒和滅菌微生物污染是造成細(xì)胞培養(yǎng)失敗的主要原因(一)物理消毒法1.紫外線消毒:紫外線是一種低能量的電磁輻射,可殺死多種微生物。革蘭陰性菌zui為敏感,其次是陽(yáng)性菌,再次為芽孢,真菌孢子的抵抗力zui強(qiáng)。紫外線的直接作用是通過(guò)破壞微生物的核酸及蛋白質(zhì)等而使其滅活,間接作用是通過(guò)紫外線照射產(chǎn)生的臭氧殺死微生物。直接照射培養(yǎng)室消毒,用法簡(jiǎn)單,效果好。紫外燈的消毒效果同紫外燈的輻射強(qiáng)度和照射劑量呈正相關(guān),輻射強(qiáng)度隨燈距離增加而降低,照射劑量和照射時(shí)間呈正比。因此紫外燈同被照射物的距...
  • 2014

    9-25

    小牛血清使用注意事項(xiàng)以及正確的凍存方法

    使用小牛血清時(shí)的注意事項(xiàng)具體如下:1.供血的新生小牛必須是健康牛的產(chǎn)仔,并在產(chǎn)后24小時(shí)內(nèi)抽血,此期間不得吸取母乳。2.以無(wú)菌操作自頸動(dòng)脈放血,并在無(wú)菌條件下分離血清及濾菌,全過(guò)程在36小時(shí)內(nèi)完成。經(jīng)濾菌的血清登一20IC保存。3.血清使用前需做細(xì)蔭、支原體培養(yǎng)及內(nèi)毒素測(cè)定,在確實(shí)無(wú)污染的情況下方可使用。4.每批小牛血清測(cè)定總蛋白含量并分別配成10%,20%,25%于墓礎(chǔ)培養(yǎng)墓和HAT培養(yǎng)墓中,對(duì)骨髓瘤細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),觀察小牛血清對(duì)瘤細(xì)胞和融合細(xì)胞的細(xì)胞毒性。若在2...
  • 2014

    9-23

    根據(jù)歷史起源來(lái)談“植物組織培養(yǎng)應(yīng)用前景”

    19世紀(jì)30年代,德國(guó)植物學(xué)施萊登和德國(guó)動(dòng)物學(xué)家施旺創(chuàng)立了細(xì)胞學(xué)說(shuō),根據(jù)這一學(xué)說(shuō),如果給細(xì)胞提供和生物體內(nèi)一樣的條件,每個(gè)細(xì)胞都應(yīng)該能夠獨(dú)立生活;1902年,德國(guó)植物學(xué)家哈伯蘭特細(xì)胞性的理論是植物組培的理論基礎(chǔ)。1958年,一個(gè)振奮人心的消息從美國(guó)傳向世界各地,美國(guó)植物學(xué)家斯蒂瓦特等人,用胡蘿卜的嫩皮的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),終于得到了完整植株,并且這一植株能夠開(kāi)花結(jié)果,證實(shí)了哈伯蘭特在五十多年前關(guān)于細(xì)胞的預(yù)言。植物組培的簡(jiǎn)單過(guò)程如下:剪接植物器官或組織——經(jīng)過(guò)脫分化(也叫去分化)形成...
  • 2014

    9-23

    根據(jù)歷史起源來(lái)談“植物組織培養(yǎng)應(yīng)用前景

    19世紀(jì)30年代,德國(guó)植物學(xué)施萊登和德國(guó)動(dòng)物學(xué)家施旺創(chuàng)立了細(xì)胞學(xué)說(shuō),根據(jù)這一學(xué)說(shuō),如果給細(xì)胞提供和生物體內(nèi)一樣的條件,每個(gè)細(xì)胞都應(yīng)該能夠獨(dú)立生活;1902年,德國(guó)植物學(xué)家哈伯蘭特細(xì)胞性的理論是植物組培的理論基礎(chǔ)。1958年,一個(gè)振奮人心的消息從美國(guó)傳向世界各地,美國(guó)植物學(xué)家斯蒂瓦特等人,用胡蘿卜的嫩皮的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),終于得到了完整植株,并且這一植株能夠開(kāi)花結(jié)果,證實(shí)了哈伯蘭特在五十多年前關(guān)于細(xì)胞的預(yù)言。植物組培的簡(jiǎn)單過(guò)程如下:剪接植物器官或組織——經(jīng)過(guò)脫分化(也叫去分化)形成...
  • 2014

    9-16

    ELISA法細(xì)胞凋亡檢測(cè)操作步驟

    細(xì)胞凋亡的發(fā)生是由于鈣-鎂依賴性核酸酶進(jìn)入核小體間切割DNA,產(chǎn)生180bp~200bp或其倍數(shù)的核小體片段。而核小體由于與組蛋白H2A、H2B、H3和H4形成緊密復(fù)合物而不被核酸內(nèi)切酶切割。采用雙抗體夾心酶免疫法,應(yīng)用小鼠抗DNA和抗組蛋白的單克隆抗體,與核小體片段形成夾心結(jié)構(gòu),可特異性檢測(cè)細(xì)胞溶解物中的核小體片段。常見(jiàn)樣本以及基本操作方法:1.收集細(xì)胞,離心后,用200µl溶細(xì)胞緩沖液重新懸浮,室溫下作用30min。(培養(yǎng)細(xì)胞的上清液、血漿和血清都可作為檢測(cè)樣...
  • 2014

    9-9

    大鼠胰島素ELISA試劑盒相關(guān)介紹

    胰島素是由胰島B細(xì)胞受內(nèi)源性或外源性物質(zhì)如葡萄糖、乳糖、核糖、精氨酸、胰高血糖素等的刺激而分泌的一種蛋白質(zhì)激素。胰島素是機(jī)體內(nèi)*降低血糖的激素,同時(shí)促進(jìn)糖原、脂肪、蛋白質(zhì)合成。大鼠胰島素ELISA試劑盒是一種酶聯(lián)免疫吸附技術(shù),應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠胰島素(INS)水平。用純化的大鼠胰島素(INS)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入胰島素(INS),再與HRP標(biāo)記的胰島素(INS)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯...
  • 2014

    9-3

    探討“ELISA實(shí)驗(yàn)重復(fù)性不佳及出現(xiàn)白板、陽(yáng)性對(duì)照不顯色”

    (一)、重復(fù)性不佳可能原因及解決方法?1.樣品數(shù)量多少不一,加樣時(shí)間有長(zhǎng)有短。重復(fù)某一樣品時(shí),加樣時(shí)間盡可能與*次接近2.保溫時(shí)間不一致,洗滌條件不一致,操作人員不一致。重復(fù)測(cè)定標(biāo)本,操作條件、人員等應(yīng)盡可能與上次保持一致,以排除這些因素造成的不一致的可能性。3.加樣量不一致。樣本稀釋前應(yīng)充分混勻,盡可能使用同一移液器并裝緊吸嘴。。(二)出現(xiàn)白板,陽(yáng)性對(duì)照不顯色可能原因及解決方法?1.顯色液變質(zhì)更換新的顯色液2.洗滌液配置有誤請(qǐng)按說(shuō)明書所示稀釋倍數(shù)配制。3.未加酶結(jié)合物而認(rèn)為...
  • 2014

    9-1

    在同一條件下做WB實(shí)驗(yàn)為什么一張膜顯影,一張膜未顯影?

    近期恒遠(yuǎn)經(jīng)常接到客戶的:同一條件下,除了測(cè)的指標(biāo)不一樣,為什么有張膜顯影,有張未顯影???上海恒遠(yuǎn)技術(shù)分析:在同一條件下,如果一張膜顯影,一張膜未顯影,可以逐一查找原因:1、你是否兩張膜上都設(shè)有陽(yáng)性對(duì)照?如果有,一張膜有信號(hào),一張沒(méi)信號(hào),可能是操作過(guò)程中有問(wèn)題(可能原因是(1)、你結(jié)合底物會(huì)不會(huì)有問(wèn)題,即沒(méi)有充分結(jié)合好,或者結(jié)合時(shí)間太短,(2)、你要確定兩張膜都是用新的底物反應(yīng)液,(3)、就是沒(méi)有信號(hào)的膜會(huì)不會(huì)壓片時(shí)間太短,如果使用儀器掃片就不存在這種問(wèn)題,)所以原因比較多,...
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